| 适用范围 | 试剂 |
|---|---|
| 使用方法 | 细胞传代： 1. 37℃水浴预热 CHO 无血清完全培养基； 2. 从培养箱中取出摇瓶，取少量细胞悬液进行细胞密度及活力检测； 3. 按照密度为3-5×105/ml个细胞接种至新的摇瓶中，置于37℃、CO2含量为5%-8%的培养箱中，摇床( 振幅50mm,转速110-120rpm）上培养。 4. 当活细胞密度≥4×106时进行传代，使用新鲜CHO无血清培养基按3-5×105/ml重悬细胞，并将细胞接种至新摇瓶。 培养基适应（大部分情况不需要）： 直接适应 1. 将细胞直接稀释到预热的CHO培养基中，活细胞密度为3-5×105/ml，转移到合适的培养容器中。 2. 置于培养箱，监测细胞生长情况。如果使用直接适应法观察到细胞生长不理想，则使用顺序适应法。 顺序适应 1. 细胞以3-5×105/ml 的密度接种至含1/3 CHO无血清培养基和2/3原培养基的培养瓶中，置于37℃、5%-8% CO2培养箱中培养。 2. 当细胞密度达到4×106/ml，以3-5×105/ml 的密度进行传代，接种至含2/3 CHO无血清培养基和1/3原培养基中培养。 3. 当细胞密度达到4×106/ml，以3-5×105/ml个活细胞密度进行传代，接种至含100%CHO无血清培养基中培养。 4. 使用100% CHO无血清完全培养基继续传代几次后，活细胞数应超过4×106/mL，培养4-6天存活率≥90%，此时被认为培养基适应已经完成。 瞬时转染： 1. 在瞬转开始之前，细胞应完全适应CHO无血清培养基，CHO细胞生长状态正常，传代倍增时间稳定（一般20-24h），细胞活率维持95%以上，方可进行瞬转测试。 2. 配置DNA-PEI 核酸-转染试剂复合物(DNA：1.5mg/L，PEI：7.5mg/L），室温孵育15-20min。 3. 转染时调整活细胞密度为6 x106 cells/ml（离心去掉旧培养液，改用新培养基最佳），并在Day1加入1.5mM 丙戊酸钠。转染之后的整个培养过程中，应该密切注意细胞活率和密度，在Day1-3-5-7-9-11添加5%补料进行高密度高产量表达，葡萄糖按需添加。 4. 当细胞活率低于80%，培养结束，收取上清液，纯化目标产物。 5. （培养过程中参数建议如下：初始培养温度36.5℃，Day1温度降低至32~33℃，pH:7.1±0.2，DO：40%。摇床转速120rpm，振幅50mm, 5-8%CO2 ）。 |
| 注意事项 | |
| 声明 | |
| 保存条件 | 2-8℃，有效期12个月。 |
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